Experimento #6

Cromatografia

Objetivos

Ø  Poner de manifiesto el principio de operación de la cromatografía en papel y examinar algunos productos comerciales sin necesidad de nebulizar con reactivos para localizar las manchas. 

Ø  Medir la distancia recorrida por el absorbente. 

Ø  Calcula la Rf para cada sustancia.

Introducción

La cromatografía es una técnica de separación extraordinariamente versátil que presenta distintas variantes. En toda separación cromatografíca hay dos fases (sólida, líquida o gas) una móvil y otra estacionaria, que se mueven una con respecto de la otra manteniendo un contacto íntimo. La muestra se introduce en la fase móvil y los componentes de la muestra se distribuyen entre la fase estacionaria y la móvil. Los componentes de la mezcla a separar invierten un tiempo diferente en recorrer cada una de las fases, con lo que se produce la separación. Si un componente está la mayor parte del tiempo en la fase móvil el producto se mueve rápidamente, mientras que si se encuentra la mayor parte en la fase estacionaria, el producto queda retenido y su salida es mucho más lenta.

La cromatografía puede cumplir dos funciones básicas que no se excluyen mutuamente:

• Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos más puros y que puedan ser usados posteriormente (etapa final de muchas síntesis).
• Medir la proporción de los componentes de la mezcla (finalidad analítica). En este caso, las cantidades de material empleadas son pequeñas.

Las distintas técnicas cromatográficas se pueden dividir según cómo esté dispuesta la fase estacionaria:

• Cromatografía plana. La fase estacionaria se sitúa sobre una placa plana o sobre un papel. Las principales técnicas son:
• Cromatografía en papel
• Cromatografía en capa fina
• Cromatografía en columna. La fase estacionaria se sitúa dentro de una columna. Según el fluido empleado como fase móvil se distinguen:
• Cromatografía de líquidos
• Cromatografía de gases
• Cromatografía de fluidos supercríticos

tipo	fase estacionaria	fase movil
líquido-sólido	sólido inerte como gel de sílice o alúmina	disolventes
intercambio iónico	resina cambiadora	soluciones acuosas
líquido-líquido	líquido adsorbido en un soporte sólido	líquido
gas-líquido	película de líquido adsorbida sobre un soporte sólido	gas

La cromatografía en papeles un proceso muy utilizado en los laboratorios para realizar análisis cualitativos ya que pese a no ser una técnica muy potente no requiere de ningún tipo de equipamiento.

La fase estacionaria está constituida simplemente por una tira de papel de filtro. La muestra se deposita en un extremo colocando pequeñas gotas de la solución y evaporando el disolvente. Luego el disolvente empleado como fase móvil se hace ascender por capilaridad. Esto es, se coloca la tira de papel verticalmente y con la muestra del lado de abajo dentro de un recipiente que contiene fase móvil en el fondo.

Después de unos minutos cuando el disolvente deja de ascender o ha llegado al extremo se retira el papel y seca. Si el disolvente elegido fue adecuado y las sustancias tienen color propio se verán las manchas de distinto color separadas. Cuando los componentes no tienen color propio el papel se somete a procesos de revelado.

Hay varios factores de los cuales depende una cromatografía eficaz: la elección del disolvente y la del papel de filtro.

Materiales

§   Retazo de Papel filtro

§  Vaso químico

§  Probeta

§  Embase de vidrio

Reactivos:

§  Sacarosa: El azúcar pura en cantidad excesiva puede ser peligroso porque desajusta los delicados mecanismos de regulación que permiten almacenar y quemar los azúcares simples.

§  Fructuosa: El consumo de productos edulcorados con fructosa  puede resultar muy engordante, no sólo por su contenido en calorías sino también porque es metabolizada de una forma diferente a otros carbohidratos, favoreciendo en gran medida la acumulación de grasa.

§  Glucosa : Está contraindicada en la diabetes mellitus y en el coma de la misma. Se debe restringir su empleo en pacientes con edema con o sin hiponatremia; en la insuficiencia cardiaca con edema pulmonar o sin éste y en ­pacientes oligo-anúricos. En el coma hiperosmolar y en la hiperglucemia. Las contraindicaciones principales serían el coma addisoniano y la diabetes.

Procedimiento